內(nèi)毒素ELISA檢測(cè)試劑盒是一種用于體外定量檢測(cè)生物樣本中內(nèi)毒素（ET）濃度的工具，在科研和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。該試劑盒多基于雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)。以雙抗體夾心法為例，用純化的內(nèi)毒素抗體包被微孔板制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)毒素，再與HRP標(biāo)記的內(nèi)毒素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹d洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)毒素呈正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中內(nèi)毒素濃度。
?。?）試劑平衡
未開(kāi)封試劑：
從冰箱取出后，室溫平衡30分鐘（具體時(shí)間參考說(shuō)明書(shū)），避免溫差導(dǎo)致冷凝水影響反應(yīng)。
已分裝試劑：
若需冷凍保存（如-20℃），提前取出置于2-8℃緩慢解凍，避免直接常溫解凍。
?。?）器材準(zhǔn)備
耗材要求：
使用無(wú)酶、無(wú)內(nèi)毒素污染的耗材（如進(jìn)口ELISA專(zhuān)用吸頭、一次性EP管、96孔板等）。
槍頭盒需滅菌處理，避免交叉污染。
儀器校準(zhǔn)：
提前預(yù)熱酶標(biāo)儀（37℃），校準(zhǔn)波長(zhǎng)（通常450 nm或廠家指定波長(zhǎng)）。
洗板機(jī)檢查：確保吸液充分，殘留液≤5μL/孔。
（3）標(biāo)準(zhǔn)品配制
梯度稀釋?zhuān)?/div>
按說(shuō)明書(shū)用“標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液”逐級(jí)稀釋?zhuān)ㄈ?:2或1:10），混勻后立即使用。
示例：原液濃度100 EU/mL→50→25→12.5 EU/mL等。
注意事項(xiàng)：
每級(jí)稀釋后輕輕拍打混勻，避免氣泡產(chǎn)生。
最后一管作為空白對(duì)照（如PBS或?qū)Ｓ孟♂屢海?/div>
